ОРГАНИЧЕСКОЕ РАССТРОЙСТВО ЛИЧНОСТИ ПО СМЕШАННОМУ ТИПУ

Обращаю ваше внимание, что Минске уже лечат клетками стволовыми эпилепсию после травм головы. Но мне моему-то кажется ели они лечат эпилепсию после травм, то и могли бы лечить алкогольную энцефалопатии и органическое поражение мозга. И прошу заметить этим методом лечат в Минске а не за границей. Я не врач, но я понимаю так что нейрон разрушет от трамы точно так же как и после алкоголизма хронического, сответственно, если эта терапия лечит последствия травм головы она наверное могла бы и последствия алкоголизма вылечить. Эта процедура проводится бесплатно в Минске, а не в Германии. Единственно то, что у еня была как врачи пишут паранойя, мне казалось что за мной следят, если кто-то говорит и мне казалось, что говорят обо мне, а сейчас этот зловонный запах из головы может это тоже признак крытой эпилепсии. Могут меня и не взять. Мне кажется после травм мозг поражается, то и после алкоголизма нейроны точно так же разрушаются. Единственно то, что стволовая клетка замещает пораженный участок травмой Но тут описаны частые признаки эпилепсии.

Критериями включения являлись: мужчины и женщины в возрасте старше 20 лет; частые
приступы; наличие резистентной формы эпилепсии, когда любые комбинации 2–3 противоэпилептических средств, вклю-
чая новейшие, не оказывали заметного влияния на частоту и тяжесть приступов (карбамазепин, вальпроевая кислота, то-
пирамат, ламотриджин, фенобарбитал — в виде монотерапии и в различных комбинациях). Критериями исключения яв-
лялись: воспалительные процессы головного мозга; хронически протекающие психозы с частыми декомпенсациями, сла-
боумием и выраженной социальной дезадаптацией; наличие хронических соматических и неврологических заболеваний
в стадии обострения, требующих активной терапии; новообразования.
Под наблюдением находились 22 пациента (13 мужчин и 9 женщин) с фармак



БЕЗОПАСНОСТЬ И ПЕРСПЕКТИВНОСТЬ ЛЕЧЕНИЯ СИМПТОМАТИЧЕСКОЙ ЭПИЛЕПСИИ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АУТОЛОГИЧНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА
Докукина Т.В.1
, Хлебоказов Ф.П.1
, Игнатенко С.И.2
, Космачева С.М.2
, Гончарова Н.В.2
, Потапнев М.П.2
,
Махров М.В.1
, Королевич П.П.1
, Шамрук И.В.1
, Мисюк Н.Н.1
1
Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр психического здоровья»,
Минск, Республика Беларусь; 2
Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр трансфузиологии
и медицинских биотехнологий», Минск, Беларусь
Реферат. В статье представлены данные о применении аутологичных мультипотентных мезенхимальных стро-
мальных клеток (ММСК) для лечения 10 пациентов с медикаментозно-резистентной симптоматической эпилепсией. По-
казано, что внутривенное введение 40,0–101,0 млн (в среднем 68,2±8,48 млн) ММСК и через 5–7 дней эндолюмбальное
введение 2,7–8 млн (в среднем 6,34±0,72 млн) нейроиндуцированных ММСК не вызвало у пациентов неблагоприятных
реакций и осложнений. Более того, при сроках наблюдения 12–21 мес. у 8 из 10 пациентов отмечено снижение или исчез-
новение приступов, уменьшение их тяжести. Сделан вывод о перспективности использования предложенной технологии
клеточной терапии для лечения фармакорезистентных форм симптоматической эпилепсии.
Ключевые слова: симптоматическая эпилепсия, резистентные приступы, мультипотентные мезенхимальные
стромальные клетки, трансплантация, электроэнцефалограмма.
Введение. Эпилепсия является одним из наиболее распространенных нервно-психических заболеваний. В мире
насчитывается более 50 млн пациентов с эпилепсией [5]. Эпилепсия — это сложное, полиморфное по своим проявлениям
заболевание, в патогенезе которого ведущую роль играет первичное локальное повреждение межнейрональных связей го-
ловного мозга или генетически обусловленное гипервозбуждение с последующей гибелью нейронов, т. е. нейродегенера-
ция. В последние годы установлено, что продолжительные судорожные приступы вызывают повреждение головного моз-
га, и даже однократный припадок может привести к «апоптозоподобной» гибели нейронов [4]. С другой стороны, при экс-
периментальной височной эпилепсии у животных было показано, что судороги не только повреждают гиппокампальную
формацию, но и стимулируют нейрогенез [10].
Клеточная терапия рассматривается как перспективный подход для лечения эпилепсии из-за ограниченности тера-
певтической эффективности противоэпилептических препаратов в 20–40% случаев у пациентов, страдающих этой болез-
нью. В настоящее время технологии лечения стволовыми клетками оценены в доклинических исследованиях, продемон-
стрировавших их благотворное влияние на припадки у экспериментальных животных. Локальное действие стволовых кле-
ток на звенья патогенеза эпилепсии связывают с секрецией нейротрофических факторов и противовоспалительным дей-
ствием [6, 7].
При наличии повреждения в организме пациентов ММСК мигрируют в область деструкции и под влиянием ми-
кроокружения дифференцируются в тканеспецифичные стромальные и специализированные клетки [7]. Нейрогенно-
дифференцируемые ММСК человека выделяют нейротрофический фактор головного мозга, который оказывает нейропро-
тективное действие на нервные клетки, что способствует уменьшению частоты и тяжести эпилептических приступов [9].
Экспериментальные исследования Holmes G.L. et al. (1991) показали, что введенные ММСК регулируют постсинаптиче-
27
ские потенциалы возбуждения за счет влияния на концентрацию гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) [8]. На сегодняш-
ний день широко обсуждается высокий потенциал ММСК и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток для ле-
чения различных неврологических заболеваний. Тем не менее сохраняются некоторые препятствия для клинического при-
менения клеточной терапии, поэтому широкомасштабные клинические испытания не проводились [7].
Цель работы — предварительная оценка безопасности и эффективности применения наращенных in vitro аутоло-
гичных ММСК у пациентов с резистентной симптоматической эпилепсией.
Материалы и методы. Характеристика пациентов. Клинические исследования проводили в стационаре
ГУ «РНПЦ психического здоровья» Министерства здравоохранения Республики Беларусь в течение 2011–2015 гг.
Исследование было одобрено Этическим комитетом центра. Все пациенты подписывали информированное согла-
сие для участия в исследовании. Критериями включения являлись: мужчины и женщины в возрасте старше 20 лет; частые
приступы; наличие резистентной формы эпилепсии, когда любые комбинации 2–3 противоэпилептических средств, вклю-
чая новейшие, не оказывали заметного влияния на частоту и тяжесть приступов (карбамазепин, вальпроевая кислота, то-
пирамат, ламотриджин, фенобарбитал — в виде монотерапии и в различных комбинациях). Критериями исключения яв-
лялись: воспалительные процессы головного мозга; хронически протекающие психозы с частыми декомпенсациями, сла-
боумием и выраженной социальной дезадаптацией; наличие хронических соматических и неврологических заболеваний
в стадии обострения, требующих активной терапии; новообразования.
Под наблюдением находились 22 пациента (13 мужчин и 9 женщин) с фармакорезистентными формами эпилеп-
сии, распределенные в 2 исследовательские группы с применением рандомизации. Возраст пациентов составил от 20 до
56 лет, длительность болезни — от 7 до 29 лет. У всех пациентов отмечалась симптоматическая форма эпилепсии. Наи-
более частым этиологическим фактором являлись нейроинфекция, перинатальная патология и черепно-мозговая травма.
По результатам исходного клинического исследования установлено, что у всех пациентов отмечалась высокая ча-
стота эпилептических приступов — более 3-х в мес. Характер приступов представлен в таблице 1.
Таблица 1. — Характеристика пациентов, включенных в исследование
Критерии Группа сравнения
(стандартный протокол лечения)
Основная группа
(терапия с использованием ММСК)
Количество пациентов 12 10
Женщины/мужчины 5/7 4/6
Возраст, Me (M±m), годы 32,5 (20–56) 31,5 (20–44)
Возраст появления приступов,
Me (M±m), годы 9,3 (1–33) 14,3 (2–38)
Когнитивные нарушения 12/12 10/10
Личностные расстройства 3/12 1/10
Тип приступов:
генерализованные тонико-клонические
комплексные парциальные
простые парциальные
несколько видов приступов
7
10
3
8/12
8
7
2
7/10
При первоначальной оценке психического состояния пациентов, согласно Международной классификации болез-
ней 10-го пересмотра, когнитивные расстройства выявлены у всех пациентов, органическое расстройство личности —
в 4-х случаях (таблица 1).
Общее клиническое исследование проводилось согласно протоколам обследования психических и неврологиче-
ских пациентов. Проводился объективный осмотр, тщательное клинико-лабораторное и функциональное обследование.
Пациенты консультировались врачом-неврологом, врачом-терапевтом, врачом-психиатром, врачом-окулистом, врачом-
отоларингологом, психологом, женщины были осмотрены врачом-гинекологом. Всем пациентам проводилось структури-
рованное психиатрическое интервью. Заболевание характеризовалось симптомами диффузного поражения головного моз-
га, частыми эпилептическими приступами, тяжелыми постприступными состояниями, сопутствующими психическими
расстройствами. Комбинированная трансплантация аутологичных ММСК проводилась на фоне противоэпилептической
терапии. Для исследования функционального состояния головного мозга, определения типа эпилептического приступа,
а также путей и зон распространения эпилептогенных импульсов, оценки эффективности лечения пациентам в динами-
ке проводилась электроэнцефалография (ЭЭГ) и видеомониторирование ЭЭГ. Для оценки когнитивных функций исполь-
зовался тест MMSE. Процессы произвольного внимания и работоспособность изучались при помощи «таблиц Шульте»
и «счета по Крепелину» [2]. Исследование кратковременной памяти проводилось при помощи методики запоминания 10
слов Лурия А.Р. [1]. Исследование тревожности проводилось при помощи теста «Шкала реактивной и личностной тре-
вожности» (опросник Спилбергера Ч.Д. в модификации Ханина Ю.Л.), позволяющего дифференцированно измерять тре-
вожность и как личностное свойство, и как состояние [3]. Для оценки тревоги и депрессии использовалась «Госпитальная
шкала тревоги и депрессии».
Ожидаемый положительный клинический эффект базировался на представлениях о трофическом и иммуносупрес-
сорном действии ММСК на нейродегенеративные и воспалительные процессы при эпилепсии [6, 7].
ММСК. Для получения аутологичных ММСК у пациентов осуществляли забор 40 мл костного мозга под мест-
ной анестезией из гребня подвздошной кости. Костномозговой пунктат транспортировали в специализированную лабо-
28
раторию для выделения ММСК из фракции мононуклеаров методом адгезии на пластике и последующего культивиро-
вания в течение 3–5 недель (2–3 пассажа) в питательной среде альфа-МЕМ с рибонуклеозидами и глютамаксом (Sigma,
Invitrogen), 5% сыворотки АВ (IV), 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина. В процессе культивирования кон-
тролировали стерильность, оценивали морфологию и пролиферативную активность клеток.
Нейрогенную дифференцировку части выросших in vitro ММСК проводили путем дополнительного культивирова-
ния в среде Neurocult-XF proliferation medium (StemcellTech.) в течение 7 дней. Контроль качества ММСК перед введени-
ем включал стерильность, фенотипический контроль клеток, для нейродифференцированных ММСК — наличие генети-
ческих маркеров нейродифференцировки (нестин, NSE).
Этапы терапии с использованием аутологичных ММСК. Введение аутологичных ММСК осуществляли в усло-
виях стационара на фоне стандартной противоэпилептической терапии с определением концентрации препаратов в кро-
ви. С целью уменьшения риска побочных эффектов трансплантацию ММСК пациентам проводили в 2 этапа. На первом
этапе проводилась трансплантация аутологичных недифференцированных ММСК: однократное медленное внутривенное
введение 40,0–101,0 млн (в среднем 68,2±8,48 млн) клеток в 20 мл раствора натрия хлорида 0,9% для инфузий, содержа-
щего 5% аутологичной сыворотки. Жизнеспособность клеток в трансплантате составляла 98,1±0,26%. Более 95% ММСК
экспрессировали маркеры CD105, CD90, и менее 5% — CD45, CD34. За время наращивания клеточной массы количество
клеток увеличилось в среднем в 1,04×105
раза. На втором этапе через 5–7 дней после первой трансплантации пациенту
вводили в спинномозговой канал 2,7–8 млн (в среднем 6,34±0,72 млн) нейроиндуцированных ММСК в 5 мл раствора на-
трия хлорида 0,9% для инфузий, содержащего 5% аутологичной сыворотки. Жизнеспособность клеток составляла 98,8%.
Процедуру проводили при укладывании пациента на кушетку на бок, на уровне промежутка позвонков L3–L4 под мест-
ной анестезией 0,5% раствора новокаина.
Оценку безопасности цикла клеточной терапии с использованием аутологичных ММСК проводили путем оценки
лабораторной и клинико-нейрофизиологической реакции пациентов на процедуру введения клеточного материала.
Результаты трансплантации аутологичных ММСК оценены в сроки наблюдения от 3 до 17 мес. после их введения.
Тяжесть состояния пациентов оценивали в соответствии с клиническими, нейрофизиологическими и патопсихологиче-
скими критериями.
Результаты и их обсуждение. Безопасность процедур, связанных с клеточной терапией, была оценена у всех па-
циентов с эпилепсией. Все они хорошо перенесли процедуру забора костного мозга и трансплантацию ММСК: побочных
эффектов или аллергических реакций зафиксировано не было.
Средний возраст пациентов обеих групп составил около 32 лет. Соотношение числа женщин и мужчин было сопо-
ставимо в обеих группах. Возраст появления приступов варьировал в широких пределах, в то время как средние значения
также были сопоставимы. У всех обследованных пациентов отмечались когнитивные расстройства. По характеру присту-
пов пациенты обеих групп также не различались (таблица 2).
Таблица 2. — Частота приступов у пациентов в исследуемых группах
Показатель Группа сравнения
(стандартный протокол лечения), n = 12
Основная группа (терапия с использованием
ММСК), n = 10
Частота приступов,
раз в мес. через 3 мес. через 12–15 мес. через 3 мес. через 12–21 мес.
Ремиссия
Снижение частоты
более чем на 50%
0/12
4/12
0/12
2/12
1/10
1/10
3/10
5/10
Снижение частоты
менее, чем на 50%
Без эффекта
1/12
7/12
1/12
9/12
5/10
3/10
1/10
1/10
Основанием для клеточной терапии пациентам с эпилепсией являлись неэффективность проводимой ранее фарма-
котерапии и согласие пациентов на осуществление клеточной терапии, включая процедуры забора костного мозга, а так-
же внутривенное и эндолюмбальное введение наращенных in vitro аутологичных ММСК.
Мы оценивали изменения в состоянии пациентов обеих групп более 1 года после терапии. Как показано в табли-
це 2, в течение 12–15 мес. после начала исследования у 10 из 12 пациентов группы сравнения отсутствовал эффект (зна-
чимое изменение частоты приступов, результатов анкетирования, ЭЭГ записи). Пациенты основной группы, получившие
комплексное лечение с использованием ММСК, достигли значимо лучших результатов: у 30% пациентов достигнута дли-
тельная ремиссия в период 12–21 мес. после терапии (отсутствие приступов в течение более чем 6 мес.), у 80% пациентов
отмечался значимый клинический ответ. У большинства пациентов основной группы отмечалась трансформация генера-
лизованных тонико-клонических приступов в комплексные парциальные (психомоторные) и даже простые парциальные
приступы. Следует отметить, что эффект влияния ММСК на состояние пациента был более очевидным в долговременной
перспективе (12 мес. и более) по сравнению с эффектом через 3 мес. после применения клеточной терапии.
Достижение стойкой клинической ремиссии у 3 пациентов основной группы через 12 мес. после лечения сопрово-
ждалось положительными изменениями на ЭЭГ в виде снижения пароксизмальной активности, уменьшения числа вспы-
шек вследствие положительного влияния трансплантации МСК на метаболизм головного мозга. Анализ ЭЭГ свидетель-
ствует о нормализации пиковой частоты у 4 из 10 пациентов исследуемой группы и у 1 из 12 пациентов группы сравне-
ния. Таким образом, результаты ЭЭГ-исследования как визуальные, так и компьютерные, коррелировали с положительной
динамикой клинических показателей.
29
Заключение. В исследовании мы представили первые результаты клинического применения ММСК для терапии
пациентов с резистентной эпилепсией. Вопрос безопасности клеточной терапии широко обсуждаем. Во-первых, мы ис-
пользуем аутологичные стволовые клетки во избежание иммунной сенсибилизации трансплантированных клеток. Во-
вторых, для клинического применения мы используем генетически неизмененные стволовые клетки, чтобы избежать пе-
репрограммирования стволовых клеток или использования экзогенной ДНК, которые несут риск нестабильности генома
и генетических мутаций с неизвестными последствиями в долгосрочной перспективе. В-третьих, мы использовали два ме-
тода доставки ММСК в организм пациента с эпилепсией (внутривенный, эндолюмбальный).
Наше исследование продолжается, но уже полученные первые данные наглядно продемонстрировали безопас-
ность применения трансплантации ММСК для лечения резистентной эпилепсии. Мы не выявили никаких неблагоприят-
ных реакций и осложнений, изменений лабораторных или клинических показателей после применения клеточной тера-
пии. Кроме того, в основной группе пациентов отмечались положительные эффекты терапии (в т. ч. ремиссия более 6 мес.)
в отличие от пациентов из группы сравнения.
Первый опыт проведения клеточной терапии пациентам с эпилепсией в Республике Беларусь показал, что внутри-
венное введение аутологичных ММСК и эндолюмбальное введение нейроиндуцированных аутологичных ММСК может
быть эффективной дополнительной терапией выбора у пациентов с фармакорезистентной формой заболевания. Получен-
ные предварительные данные подтверждают безопасность, а также перспективность использования стволовых клеток че-
ловека для терапии пациентов с эпилепсией.
Дополнительные исследования необходимы для определения более четких показаний (формы эпилепсии, степе-
ни тяжести заболевания, сопутствующих нарушений) к проведению трансплантации аутологичных ММСК и определения
целесообразности повторных курсов клеточной терапии.
Литература
1. Бизюк, А.П. Компендиум методов нейропсихологического исследования / А.П. Бизюк. — СПб.: Речь, 2005. — 400 с.
2. Блейхер, В.М. Клиническая патопсихология: рук. для врачей и клинических психологов / В.М. Блейхер, И.В. Крук, С.Н. Бо-
ков. — М.: Изд-во Моск. псих.-соц. ин-та; Воронеж: «МОДЕК», 2006. — 624 с.
3. Дерманова, И.Б. Диагностика эмоционально-нравственного развития. Исследование тревожности (Ч.Д.Спилбергер, адаптация
Ю.Л.Ханин) / И.Б. Дерманова. — СПб., 2002. — С. 124–126.
4. Neuronal apoptosis after brief and prolonged seizures / J. Bengzon [et al.] // Prog. Brain Res. — 2002. — Vol. 135. — P. 111–119.
5. de Boer, H.M. The global burden and stigma of epilepsy / H.M. de Boer, M. Mula, J.W. Sander // Epilep. Behav. — 2008. — Vol. 12,
№ 4. — P. 540–546.
6. Finding a better drug for epilepsy: anti-inflammatory targets / S. Dedeurwaerdere [et al.] // Epilepsia. — 2012. — Vol. 53, № 7. —
P. 1113–1118.
7. Ess, K.C. Patient heal thyself: modeling and treating neurological disorders using patient-derived stem cells / K.C. Ess // Exp. Biol.
Med. — 2013. — Vol. 238, № 3. — P. 308–314.
8. Holmes, G.L. Effect of neural transplants on seizure frequency and kindling in immature rats following kainic acid / G.L. Holmes // Dev.
Brain Res. — 1991. — Vol. 64, № 1–2. — P. 47–56.
9. Finding a better drug for epilepsy: antiepileptogenesis targets / K. Kobow [et al.] // Epilepsia. — 2012. — Vol. 53, № 11. — P. 1868–1876.
10. Parent, J.M. Mechanisms and functional significance of aberrant seizure-induced hippocampal neurogenesis / J.M. Parent, G.G. Murphy //
Epilepsia. — 2008. — Vol. 49, suppl. 5. — P. 19–25.
THE USE OF AUTOLOGOUS MESENCHYMAL STEM CELLS FOR THERAPY OF PATIENTS
WITH SYMPTOMATIC EPILEPSY
Dakukina T.V.1
, Hlebokazov F.P.1
, Ighnatenko S.I.2
, Кosmacheva S.M.2
,
Goncharova N.V.2
, Potapnev M.P.2
, Makhrov M.V.1
, Korolevich P.P.1
, Misyuk N.N.1
1
State Institution “Republican Scientific & Practical Center of Mental Health”, Minsk, Republic of Belarus;
2
State Institution “Republican Scientific & Practical Center of Transfusiology & Medical Biotechnologies”,
Minsk, Republic of Belarus;
An article presented the data on application of autologous mesenchymal stem cells (MMSCs) for therapy of 10 patients
suffering from drug-resistant symptomatic epilepsy. Intravenous injection of 40.0–101.0×106
(mean 68.2±8,48×106
) MMSCs
endolumbal injection of 2.7–8.0×106
(mean 6.34±0.72×106
) neuroinduced MMSCs did non induced in patients unfovarable reactions
and complications. During 3–11 months of monitoring 5 of 10 patients demonstrated decrease the frequency or disappearance of
seizures. We concluded that application of MMSC-base cellular therapy is safe and enable to facilitate seizure status in patients
with drug-resistant symptomatic epilepsy.
Keywords: symptomatic epilepsy, drug-resistant seizures, mesenchymal stem cells, transplantation, electroencephalogram.